二．使用方法

1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：

取出細胞培養瓶，75%酒精擦拭培養瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養箱中靜置2-3小時以穩定細胞狀態，然后離心換用新鮮完全培養液繼續培養或進行傳代。

2、細胞傳代：

待細胞達到一定密度（不超過1x10^6/ml）可按照以下方法換液培養或傳代。

方法①：收集細胞，1000rpm離心5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

方法②：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

貼壁細胞需要用胰酶進行消化。

3、細胞凍存：

1）將細胞懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

2）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

3）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

4、細胞復蘇： 1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁； 2）將凍存管中的細胞移至含10ml完全培養基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀用5ml完全培養基重懸，接種25cm2培養瓶，于37℃，5%CO2細胞培養箱中培養；

4）第二天，換用新鮮完全培養基繼續培養。

注：培養瓶內非完全培養基，請務必使用準備好的新鮮培養基。懸浮細胞運輸中會有少些細胞因為碰撞裂解產生碎片，收到細胞如碎片較多時，胎牛血清可以用15%培養三天，利于細胞盡快恢復狀態，細胞穩定后再調回10%即可。