| 產品名稱 |
MC3T3-E1 Subclone 14 |
| 商品貨號 |
MZ-0233 |
| 中文名稱 |
小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14 |
| 細胞數量 |
1*10^6 |
| 組織來源 |
前骨細胞；自發永生；C57BL/6 |
| 細胞種屬 |
mus musculus, mouse |
| 細胞污染 |
HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。 |
| 生長特性 |
adherent |
| 培養基 |
MEMα+10% FBS+1% P/S |
| 形態特征 |
fibroblast |
| 傳代方法 |
1:4-1:8 |
| 培養條件 |
Atmosphere: Air, 95%; CO2, 5%。Temperature: 37℃ |
| 細胞描述 |
該細胞是從克隆的但是表型各異的MC3T3-E1細胞系中分離出一系列亞克隆。從含抗壞血酸培養基生長的成骨細胞中選擇高或低成骨細胞分化、礦化的亞克隆。MC3T3亞克隆4（ATCCCRL-2593）和MC3T3亞克隆14（ATCCCRL-2594）在抗壞血酸和3到4mM無機磷酸鹽中生長表現出高水平的成骨細胞分化。它們10天后形成一個礦化良好的細胞外基質（ECM）。MC3T3亞克隆24（ATCCCRL-2594）和MC3T3亞克隆30（ATCCCRL-2596）在抗壞血酸中生長表現出很差的成骨細胞分化。 |
| 細胞傳代步驟 |
如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中 |
| 復蘇細胞步驟 |
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。 |
| 細胞凍存步驟 |
：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例；1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養基終止消化，可使用血球計數板計數。2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
| 細胞凍存 |
Freeze medium: 50% basal medium+40% FBS+10%.DMSOStorage temperature: liquid nitrogen vapor phase |
| 細胞運輸 |
干冰運輸(2ml凍存管)或活細胞運輸（T25細胞瓶） |
