一、細胞培養條件

細胞英文名稱 ：BEWO

細胞中文名稱 ：人胎盤絨膜癌細胞

生長特性 ：貼壁

培養體系：F12K+10%FBS 疏松貼壁，如有漂浮離心收集

傳代方法：建議第一次 1:2 傳代

傳代情況：2 天換液

凍存條件：細胞庫無血清凍存液  

備注：收集瓶中培養基，留作過渡培養。

二、細胞收到后處理

細胞在培養瓶中培養至良好狀態后灌滿完全培養液并封好瓶口是細胞運輸的最好辦法。收到 細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內，嚴 格無菌操作，培養箱靜置 2-4 小時。鏡下觀察：未超過 80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養 液收集至離心管中，加入 6ml 完全培養基，放入 37℃、5%CO2 孵箱培養；超過 80%匯合度時， 根據情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養步驟。（注意發貨的是密封培養瓶的話，處理 完后放入培養箱培養記得培養瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養基，另外 一瓶用自己配的完全培養基）

三、細胞培養步驟

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入 5mL 培養基 混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 5 分鐘，棄去上清液，補加 4-6mL 完全培養基后吹勻。然 后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入 6cm 皿中），培養過夜。第二 天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。  

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1-2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培養箱中消化 1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺， 輕敲幾下培養瓶后加 5ml 以上含 10%血清的完全培養基終止消化。

3.輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在 1000RPM 條件下離心 8-10 分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。

4. 按 5-6ml/瓶補加培養液，將細胞懸液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 5-6 ml 培養液 的新皿中或者瓶中。

PS：若客戶收到 2ml 小管細胞，收到細胞后，用 75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或 安全柜內，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至 T25 培養瓶或 6cm 培養皿，加入 5ml 左右完 全培養基混勻，放入培養箱過夜培養后查看細胞密度：若密度未超過 80%，換液繼續培養， 視情況傳代或者凍存。若密度超過 80%，可直接進行傳代（方法同上）。