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人正常氣道上皮細胞(HBE4-E6/E7)

人正常氣道上皮細胞HBE4-E6/E7特性:
1
 來源:人正常呼吸道
2
 形態(tài):上皮細胞樣
3
 含量:>1x106 /mL
4
 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5
 規(guī)格:T75瓶或者1mL凍存管包裝
 
運輸和保存

1)使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細胞

2)收到細胞后,可在1000RPM,常溫條件下,離心5min后,于潔凈操作臺棄去上清,加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至250px培養(yǎng)皿或者T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
 
人正常氣道上皮細胞HBE4-E6/E7用途:僅供科研使用。
                       
人正常氣道上皮細胞HBE4-E6/E7培養(yǎng)步驟
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1
 準備Keratinocyte Serum Free Medium培養(yǎng)基(Keratinocyte Serum Free Medium (K-SFM):GIBCO,貨號17005-042, Kit中含有兩種添加因子:牛腦脊液提取物(BPE,表皮生長因子(EGF),培養(yǎng)細胞時添加:0.05 mg/ml BPE5 ng/ml EGF10 ng/ml cholera toxi。注意,添加好的培養(yǎng)基不能過濾。(另外,有文獻使用DMEM/F12培養(yǎng)基,添加10%胎牛血清)
2
 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5% 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%
3
 凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 
細胞處理:
1
 復蘇
細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>250px皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2
細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 
棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 
2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察
細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 
6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 
細胞懸液按1215的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。

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