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人組織細胞淋巴瘤細胞(U-937)

人組織細胞淋巴瘤細胞U-937介紹:人組織細胞淋巴瘤細胞U-937是由Nilsson K實驗室于1974年從一名37歲的患有惡性組織細胞性淋巴瘤的白人男性的胸水中分離建立的。1979年來的研究顯示該細胞在人混合淋巴細胞培養物上清、佛波酯、Vit D3γ-IFNTNF和維A酸的誘導下可以向終末單核細胞分化。該細胞不合成免疫球蛋白,EBV陰性;可產生溶菌酶、β-2-微球蛋白,受PMA刺激后可產生TNF-α;表達C3R;可作轉染宿主;表達Fas,對TNF和抗Fas的抗體敏感。

人組織細胞淋巴瘤細胞U-937特性

1 來源:淋巴瘤

2 形態:單核細胞,懸浮生長

3 含量:>1x106

4 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5 規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式

1)干冰運輸,收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇;

2)存活細胞,收到后應繼續生長,傳代達到細胞生長狀態良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

3)收到細胞后請拍照,3天內如果發現污染,請及時拍照與我們聯系。

細胞接收后的處理:

1 收到細胞后,請檢查發貨培養瓶的狀況,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯系我們。

2 在顯微鏡下確認細胞生長狀態時,最好在低倍鏡(45X物鏡)下進行,能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態請在10X20×物鏡下,同時給剛收到的細胞拍照,(10×20×)各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存,作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態的依據。

3 觀察好細胞狀態后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h

4 貼壁細胞:在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現象,如發現貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長,可將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基的原培養瓶中(或新的培養瓶中)。

5 懸浮細胞T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中(加入按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基)。

6)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞  收到細胞后第一次傳代建議12傳代

人組織細胞淋巴瘤細胞U-937用途:僅供科研使用。                       

人組織細胞淋巴瘤細胞U-937培養操作規程,供參考

一.培養基及培養凍存條件準備:

1 準備1640培養基;優質胎牛血清,10%;雙抗,1%

2 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5% 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%

3 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。

二. 細胞處理:

1 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

將細胞懸液按121:5比例分到新皿中或者瓶中,補加培養基至6ml,放入培養箱繼續培養。第一次傳代推薦傳代密度為1:2

3細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。

下面T25瓶為例;

1,細胞凍存時,取上清,可使用血球計數板計數。

24min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞,根據細胞數量加入血清和DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細胞密度1-2xE6/ml,每支凍存管凍存1ml細胞懸液,注意凍存管做好標識。

3,將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉氮入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

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