狗腎細胞(MDCK(NBL-2))介紹：1958 年九月S.H. Madin and N.B. Darby 從一只外觀正常的成年雌性英國小獵犬的腎分離等到MDCK 細胞株。角蛋白免疫過氧化物酶染色呈陽性。MDCK 被用于研究β-粥樣蛋白前體的處理及其蛋白水解產物。

狗腎細胞(MDCK(NBL-2))特性：

1） 來源：狗腎

2） 形態：上皮細胞樣，貼壁生長

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規格：T25 瓶或者1mL 凍存管包裝

細胞接受后的處理：

1）收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發給我們。

2）請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態，去掉封口膜并將T25 瓶置于37℃培養約2-3h。

3）棄去T25 瓶中的培養基，添加6ml 明舟生物（mingzhoubio）附帶的完全培養基。

4）如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代，傳代培養用6ml 明舟生物（mingzhoubio）附帶的完全培養基。

5）接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發現污染或疑似污染，請及時與我們取得聯系。

狗腎細胞(MDCK(NBL-2))用途：僅供科研使用。

明舟生物（mingzhoubio）的狗腎細胞(MDCK(NBL-2))培養操作規程，供參考

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備MEMα培養基(MEMα， GIBCO，貨號12561-056)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。

二．細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL 細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL 培養基的15ml 離心管中混合均勻。在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，加入1mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml 培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS 潤洗細胞1-2 次。

2. 加2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3ml 此細胞的培養基終止消化。

3. 輕輕吹打后吸出，移入15ml 離心管中，在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，加入1mL 培養液后吹勻。

4. 移入到事先準備好的含有5ml 培養基的T-25 培養瓶中或含有14ml 培養基的T-75 培養瓶中培養。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，先要消化處理并進行細胞計數。消化方法按照細胞傳代方法的1-3 步驟進行，最后的重懸液使用血清。懸浮細胞直接計數后離心，用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO 后迅速混勻，按每1ml 的數量分配到凍存管中。明舟生物（mingzhoubio）按每個凍存管細胞數目大于1X106 個細胞凍存。