小鼠乳腺癌細(xì)胞(4T1)介紹:小鼠乳腺癌細(xì)胞(4T1)是從410.4 瘤株中未經(jīng)誘變篩得的6-硫鳥嘌噙抗性細(xì)胞株。當(dāng)注射到BALB/c小鼠中時，4T1 自發(fā)產(chǎn)生高轉(zhuǎn)移腫瘤，可轉(zhuǎn)移到肺，肝，淋巴結(jié)和大腦，同時在注射部位形成始發(fā)灶。誘導(dǎo)轉(zhuǎn)移時不需要摘除始發(fā)灶。4T1 細(xì)胞在BALB/c 小鼠中的生長與轉(zhuǎn)移特性與人體中的乳腺癌十分相近。這種腫瘤是人VI 期乳腺癌的動物模型。4T1-誘導(dǎo)的腫瘤在手術(shù)后及未手術(shù)情況下轉(zhuǎn)移的動力學(xué)相近，可以用作手術(shù)后及未手術(shù)模型。跟其他腫瘤模型相比，由于4T1 的抗6-硫鳥嘌噙特性，微小的轉(zhuǎn)移細(xì)胞團(tuán)(少到僅僅1 個)也可以在許多遠(yuǎn)端器官中檢測到。

小鼠乳腺癌細(xì)胞(4T1)特性:

1） 來源：小鼠乳腺癌

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25 瓶或者1mL 凍存管包裝

運(yùn)輸和保存：使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml 凍存管發(fā)送存活細(xì)胞。收到細(xì)胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min 后，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm 培養(yǎng)皿或者T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

小鼠乳腺癌細(xì)胞(4T1)用途：僅供科研使用。

小鼠乳腺癌細(xì)胞(4T1)培養(yǎng)步驟:

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640 培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37 攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)?span lang="EN-US">細(xì)胞懸液加入10cm 皿中，加入約8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS 潤洗細(xì)胞1-2 次。

2. 加2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2 到1：5 的比例分到新的含8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml 含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO 后進(jìn)行凍存。

注意事項：

1. 收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注

意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。