一、實驗材料：

粗糙脈孢霉（lys+ 野生型）Neurospora crassa  CCTCC AF 2014012

粗糙脈孢霉（lys- 缺陷型）Neurospora crassa CCTCC AF 2014014

二、粗糙脈孢霉的性質與生活史：

粗糙脈孢霉屬于真菌中的子囊菌綱，是低等的真核生物。每一菌絲細胞中含有幾十個細胞核。是遺傳分析好材料:子囊孢子是單倍體，其表型直接反應其基因型；一次只分析一個減數分裂的產物；體積小，易培養，繁殖快，一次雜交就能產生大量的后代，便于獲得正確的統計學結果；能進行有性生殖，其染色體的結構和功能類似于高等動植物；更加重要的是，子囊孢子在子囊中的線性排列順序與減數分裂中期染色體在赤道板兩側的排列順序相同，這就是粗糙脈孢霉成為了遺傳分析的好材料。

三、著絲粒作圖與遺傳分析：

利用四分子分析法，測定基因與著粒間的距離稱為著絲粒作圖。

著絲粒作圖是基于這樣的事實：減數分裂中在同源染色體的一對非姊妹染色單體的著絲粒和某雜合基因座間有沒有發生交換，和其產物四分子中的等位基因在排列方式上是不同的?？煞譃閮煞N：

四、實驗步驟：

1. 雜交接種與培養：

野生型菌株（Lys+，A）ⅹ缺陷型（Lys-，a）

2. 壓片觀察子囊：（注意觀察時期）

1）將附有子囊果的濾紙放入裝有來蘇爾溶液的培養皿中

2）取一張載玻片，滴1-2滴來蘇爾，用接種針將子囊果挑出，放在載玻片上

3）蓋上另一張載玻片，用手指壓片，將子囊果壓破

4）顯微鏡觀察，統計各種類型子囊的數量，每人統計200個左右的子囊

教學建議：

五、教學建議

粗糙脈孢霉培養基（PDA 培養基）

馬鈴薯浸取液1L

[注] 馬鈴薯浸取液：取去皮馬鈴薯200g，切成小塊，加水1.0升煮沸30分鐘，濾去馬鈴薯塊，將濾液補足至1.0升。

葡萄糖20g

瓊脂15g

自然pH

按上述配方配制PDA培養基，也可以通過試劑公司購買合成的PDA培養基，按說明書配制。

粗糙脈孢霉雜交培養基

斜面的配制：按比例取用上述培養基，加入瓊脂后需加熱沸騰至瓊脂完全溶解于馬鈴薯浸取液中，然后分裝至試管。試管規格：18*180，每支試管加入10ml上述瓊脂完全溶解的培養基液體。121度，滅菌20min。滅菌完成后

熱迅速加入100ul賴氨酸(100mg/ml)溶液至每支試管，混勻后擺制斜面。

賴氨酸溶液的配制方法：取0.5g賴氨酸粉末溶解于5ml無菌水中,待完全溶解后取0.22um孔徑的過濾器進行過濾除菌后備用。

最佳保存條件：不用于實驗時，可于室溫保存2周左右。